Banca de DEFESA: RAISSA CRISTINA DIAS GRACIANO

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : RAISSA CRISTINA DIAS GRACIANO
DATA : 27/02/2024
HORA: 08:30
LOCAL: CTAN (online)
TÍTULO:

Caracterização molecular dos parálogos do gene Hormônio liberador de gonadotropina (GnRH) em espécies de peixe de piracema

PALAVRAS-CHAVES:

genômica; peixe de piracema; reprodução em cativeiro, bioinformática.

PÁGINAS: 100
RESUMO:

O hormônio liberador de gonadotropina (GnRH) é um neuropeptídeo central na fisiologia
reprodutiva dos vertebrados, pois regula a síntese e liberação de gonadotropinas. Os peixes
teleósteos possuem dois a três genes parálogos GnRH e representam um bom modelo para
compreensão da história evolutiva e mecanismos funcionais desse hormônio. Este trabalho tem
como objetivo principal realizar a caracterização molecular de parálogos de genes GnRH (que
codificam para um pré-pró-GnRH), em duas espécies de peixe de piracema, Salminus brasiliensis e
Brycon orbignyanus, ambas com grande valor comercial e importância ecológica. A caracterização
in silico foi realizada com dados de sequenciamento de Nova-geração de DNA produzidas pela
plataforma HiSeq 2000-Illumina. Foi identificado o gene GnRH1 por meio da anotação genômica
previamente realizada via MAKER, em uma montagem genômica de novo. A sequência
codificadora do pré-pró-GnRH1 (264 pb/88 aa), recuperada na montagem de S. brasiliensis,
utilizada como isca para recuperar o mesmo gene dentro da montagem genômica de B. orbignyanus.
Sequências para o pré-pró-GnRH2 e 3 da espécie Astyanax mexicanus foram utilizadas como
consulta, no entanto, só foi possível recuperar o GnRH2 com o BLAST, e o scaffold onde ele foi
localizado parcialmente foi anotado com AUGUSTUS. O pré-pró-GnRH2 foi anotado dentro do
genoma de S. brasiliensis (258 pb/86 aa) e parcialmente no genoma de B. orbignyanus (144 pb/48
aa). O pré-pró-GnRH é um neuropeptídeo tripartido e o tamanho de cada uma dessas regiões estão
de acordo com a literatura. Entretanto, o transcrito pré-pró-GnRH1 apresentou uma variação no
segundo aminoácido do sítio proteolítico, possivelmente, na enzima responsável pelo corte. O
sequenciamento de Sanger de amplicons do GnRH1, possibilitou a validação da sequência predita e
da variação no sítio proteolítico. Os transcritos preditos foram alinhados, com sequências de GnRHs
depositadas no NCBI para peixes Characiformes. A análise filogenética agrupou as sequências de
pré-pró-GnRs em três clados distintos e formam um grupo monofilético, o que corrobora a
classificação dos parálogos aqui caracterizados. Também foram preditas sequências inéditas de
receptores para GnRH dentro do genoma de ambas espécies de interesse. Os ensaios in vivo foram
realizados administrando o decapeptídeo sintético de GnRH1: 10, 25, 35, 50 e 100 μg/kg, extrato
hipofisário de carpa (EHC) e solução salina. Não foi observada desova em nenhuma das matrizes
induzidas com o GnRH1 sintético e o tratamento com EHC não gerou uma resposta uniforme em
todos os experimentos. Obteve-se caracterização molecular dos parálogos GnRH1 e GnRH2, bem
como dos seus receptores. Esses resultados irão subsidiar novas pesquisas aplicadas à biotecnologia
para assistência na reprodução em cativeiro de peixes de piracema, estudos estruturais de
hormônios/receptores, liberação lenta e no desenvolvimento de um sistema de expressão heteróloga.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 1571747 - GABRIEL DE MENEZES YAZBECK
Interno - 2875448 - RALPH GRUPPI THOME
Externo ao Programa - 1239235 - EDUARDO PAHOR FILHO
Externa ao Programa - 2144084 - PRISCILA TOTARELLI MONTEFORTE
Externo à Instituição - Fausto Moreira da Silva Carmo - UNIVERSO
Externo à Instituição - RONALD KENNEDY LUZ - UFMG