Banca de QUALIFICAÇÃO: Carolina Alves Petit Couto

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : Carolina Alves Petit Couto
DATA : 23/02/2026
HORA: 13:30
LOCAL: https://meet.google.com/pma-ciwk-tme
TÍTULO:
PALAVRAS-CHAVES:
PÁGINAS: 97
RESUMO:

A leptospirose é uma infecção bacteriana, causada por Leptospira interrogans, transmitida por meio do contato direto ou indireto com a urina de animais sinantrópicos (principalmente roedores). No Brasil, ela é uma doença endêmica, com uma média de 3.500 casos confirmados, com letalidade média de 9%. Hoje, as formas mais utilizadas para detecção da leptospirose são os testes sorológicos. Eles consistem na detecção da presença de anticorpos contra a bactéria causadora da doença, no sangue do paciente. Os métodos disponíveis para o diagnóstico da doença apresentam limitações metodológicas e índices de sensibilidade e especificidade variáveis. Esses fatores têm comprometido eventuais melhorias no tratamento da leptospirose. Adicionado a isso, o Brasil importa grande parte dos insumos tecnológicos para o desenvolvimento de kits de diagnóstico, sendo o principal deles os antígenos. Para contornar essa limitação, se torna necessário o desenvolvimento de kits de diagnóstico com insumos nacionais, o desenvolvimento e síntese de antígenos recombinantes, que possam apresentar elevada sensibilidade e especificidade. Diante do exposto, este projeto tem o objetivo desenvolver teste de diagnóstico imunológico para a diagnosticar a leptospirose. Para isso, foi realizada a seleção dos epítopos promissores por imunobioinformática e será realizado o desenho da proteína recombinante multiepitopo que será expressa em um sistema de expressão heteróloga. Os epítopos selecionados por bioinformática, preditos como antigêncos e que não apresentaram similaridade com espécies capazes de induzir uma reação cruzada no teste, foram enviados para síntese. Ao todo 4 peptídeos foram sintetizados e nomeados PepL1, PepL2, PepL3 e PepL4. Todos foram testados frente a soros positivos e negativos para leptospirose, gentilmente cedidos pelo Laboratório de Referência Nacional de Leptospirose (LRN). As condições utilizadas para esse primeiro experimento foram tampão de adsorção Carbonato-bicarbonato (pH 9,6), bloqueio Molico 5%, diluição do soro 1:100, diluição do anticorpo secundário 1:10.000, concentração de peptídeo (100ng, 200ng, 5000ng, 1ug, 2ug). Apenas o PepL3 mostrou reatividade frente aos soros positivos em concentração de 2ug, contudo das 15 amostras utilizadas ele foi capaz de reconhecer somente 6. Foram feitas variações no tampão de adsorção e tampão de bloqueio, os resultados demonstraram que o tampão carbonato-bicarbonato para adsorção e o bloqueio com Molico 5% foram os mais eficazes. Apesar de conseguir identificar alguns soros positivos, o PepL3 ainda apresenta potencial diagnóstico baixo. A fim de melhorar foi feito um racional para uma nova síntese com esse peptídeo sendo acoplado a uma proteína para teste de nova metodologia de ELISA. Almeja-se então realizar os novos testes com o peptídeo acoplado a proteína, selecionar mais epítopos promissores para então uní-los em uma proteína multiepitopo que será expressa, purificada e testada em protocolos de ELISA frente aos mesmos soros positivos e negativos, para assim a proteína e os peptídeos obtidos serem empregados no desenvolvimento de kits de diagnósticos para leptospirose.

MEMBROS DA BANCA:
Externa à Instituição - JULIANA FERREIRA DE MOURA - UFPR
Externa à Instituição - KATIA ELIANE SANTOS AVELAR - FIOCRUZ
Presidente - 1367304 - ALEXSANDRO SOBREIRA GALDINO
Externo à Instituição - RODRIGO NUNES RODRIGUES DA SILVA - FIOCRUZ
Externo ao Programa - 1066935 - VINICIUS SILVA BELO